Annexin Ⅴ-FITC/PI Kit / 细胞凋亡检测试剂盒

相关介绍

   细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS 暴露在细胞膜外表面。PS 是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS 暴露在细胞膜外。Annexin V 具有易于结合到磷脂类如PS 的特性，对PS 有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS 转移到细胞膜外不是凋亡所*的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。因此，可以采用Annexin V 与PI 双染的方法，通过流式检测细胞早期凋亡。

储存条件2-8℃避光保存,勿冰冻。

试剂盒组份

1. 结合缓冲液4x (Binding Buffer 4x)

体积：20 Tests: 4ml（4 倍浓缩液）

50 Tests: 10ml（4 倍浓缩液）

100 Tests: 20ml（4 倍浓缩液）

稀释后溶液中各组分浓度：10mM Hepes/NaOH, pH 7.4, 140mM NaCl, 2.5mM CaCl2

2. 碘化丙锭溶液（Propidium Iodide, PI）

体积： 20 Tests: 0.2ml

50 Tests: 0.5ml

100 Tests: 1.0ml

浓度： 20ug/ml

3. 重组人Annexin V/FITC, (rh Annexin V/FITC)

来源：大肠杆菌（E.coli）

分子量：35.8 KDa

样品量：20 Tests: 0.1ml，可用于20 次实验

50 Tests: 0.25ml，可用于50 次实验

100 Tests: 0.5ml，可用于100 次实验

保存方法：于50mM Tris, 100mM NaCl, 1%BSA, 0.02%NaN3,pH7.4 溶液中保存

纯度：SDS-PAGE 及反相HPLC 表明纯度大于98%

生物活性：Annexin V 可结合于磷酯酰丝氨酸并表现出抗磷酯酶活性

细胞凋亡流式检测应用

标记的Annexin V 可结合流式细胞仪用于检测细胞外膜上的磷酯酰丝氨酸，操作流程如下：

1. 用去离子水按1:4 稀释结合缓冲液（4ml 结合缓冲液+12ml 去离子水）；

2. 用4℃预冷的PBS 洗细胞两次，用250ul 结合缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/ml；

3. 取100ul 的细胞悬液于5ml 流式管中，加入5ul Annexin V/FITC 和10 ul 20ug/ml 的碘化丙锭溶液；

4. 混匀后于室温避光孵育15 分钟；

5. 在反应管中加400 ul PBS，流式细胞仪（FACS）分析

（注：消化细胞时不能用含EDTA 的胰酶）