在组织培养过程中应严格注意以下几点无菌操作环节，才能严格控制污染的发生。

一　组培材料的无菌化组织培养中外植体材料的初代培养无菌化体系的建立是组织培养工作顺利进行的关键，要获得无菌培养材料，可采取以下几个程序。

1．外植体材料的预培养。若选用植物的茎尘、茎段或叶片作外植体时，可于枝条未萌发或未抽枝前采回来进行预培养，即在污染较少的室内或无菌条件下，将枝条用水冲洗后插入无糖营养液中，使其发枝、抽芽以备用。

2．接种前表面杀菌消毒。外植体表面用5％的次氨酸钠或0.1％～O.2％的升汞溶液处理，处理时间视植物种类、外植体部位而定。对耐受力强的植物用升汞处理较好，lOmin内即可有效杀死附着在植物体表的细菌，但要注意*除去升汞的残留，需用无菌水冲洗至少5到7次或更多。用5％～1O％的次氯酸钠处理时，不留残毒，效果也好，是常用的表面杀菌剂。也可以对外植体材料在杀菌前进行药液浸泡，以加强灭菌效果。另外对于较为名贵的外植体材料一次很难清除污染的在培养lOd～20d中可用适宜的杀菌剂进行二次处理。

3．培养基中添加抗生素及杀菌药物。对材料内部所带的细菌和霉菌等杂质，可以在培养基中添加不同浓度的抗生素或杀菌剂减轻或防止污染的出现。（如：青霉素、链毒素、甲基托布津、多菌灵等）。

二　器具、器材及培养基的灭菌定期清洗接种用具、培养瓶、培养皿等，对于长久未用的接种用具及培养瓶等要用强酸、强碱消毒，清洁剂擦洗，必要时进行高温灭菌。接种器械接种前必须进行严格的高温灭菌。及时定期检查母液及未接种的空白培养基，看是否有污染发生。注意母液要存放与冰箱中以免出现芽孢杆菌污染。芽孢杆菌是一种耐热力很强，高温很难杀死的菌类，一般存在于培养瓶壁和各种母液中，确保母液不被污染至关重要。培养基灭菌时一定注意不能堆放过满，以免阻碍蒸汽流通和热交换，造成物体内部杀菌不*，另外，待锅内压力升到0．5kg／cm2时打开放气阀，将锅内冷气*排放干净，然后再关闭放气阀进行灭菌，在稳定压力1．1kg／cm2，温度120℃下持续灭菌15min～2Omin。培养瓶的棉塞要大小适中，瓶口要包扎严紧，防止病菌孢子从口而入。

三　无菌接种操作的技术环节保持无菌

1．确保接种室内清洁无菌。定期用70％的酒精喷雾消毒，用消毒水擦试地面、工作台等，定期用甲醛加少量锰酸钾熏蒸进行空间灭菌。每次接种前用紫光灯照射接种室、缓冲间及超净台20min，对紫光灯不能照到的死角要用流动紫光灯进行杀菌。关掉紫光灯后，应提前开启超净台通风机lOmin～l5min。另外要定期检查，清洗超净台的滤布。

2．确保接种人员在接种前不带菌。操作人员要勤梳洗勤剪指甲，接种前先用肥皂洗手，并用0．1％的新洁尔灭溶液洗手3min～5min，在缓冲间穿带己消毒后的衣、帽、鞋并戴上口罩，方可进入操作室。接种时避免说话、咳嗽。

3．接种时要保持接种台整洁。双手用75％的酒精擦洗方可开始接种工作，台面放接种时*的器械，不要堆放过多物品，造成空气不畅，使操作间得不到*净化。

4．严把接种操作无污染关。初代接种时除严格按规程操作外，接种时培养基瓶口要转动在火焰上烧烤，继代转接时，对选用的扩繁材料在进接种室前，要用75％的酒精进行外部消毒，打开瓶口后应倾斜向着火焰，动作要轻，幅度应适中，每次接种后器械需在95％的酒精中浸泡，然后在火焰上灼烧灭菌。接种期间要不断用70％的酒精擦手及工作台。

5．确保接种器械在接种过程中无菌。整个接种过程中要多次用75％的酒精擦洗灭菌，避免手触碰培养物和器械伸入培养瓶内的部分。

6．做好接种后清洁预消毒。每次接种完后应*清洁接种室，并用0．5％的新洁尔灭溶液擦洗超净台及架搁等。

四　培养室内污染的控制 培养室是培养物生长的外部环境，除保持生长物体适宜的光、温、湿外，组培室的清洁、卫生对于防止污染杂物生长是不可忽视的问题。因此对组培室要定期用75％的酒精喷雾降尘处理，并用0．5％的新洁尔灭溶液洗培养架、窗户和地板。同时，及时清除组培室中的污染菌源和污染苗，并集中进行高温灭菌，另外，若进行长期大量培养，则有必要定期对培养室进行熏蒸消毒，其甲醛与高锰酸钾为2：1。

总而言之，控制或降低污染率是植物组织培养的关键技术之一，同时也是组织培养工作效率高低的重要指标之一。从组织培养的全过程来看，每一环节都可能出现污染，为了实现低污染率在组织培养中除了加强无菌意识，提高无菌操作各环节的技术规程外，还要注重无菌操作训练，提高操作水平，同时在培养基中针对性的加入抑菌剂、抗菌素。