单克隆抗体有限稀释法
时间:2015-10-16 阅读:2098
有限稀释法对于筛选杂交瘤来说,是zui普通的方法,在许多实验室中都在使用。但是,作为相对旧的技术,已经不能满足当今的需求。方法自身具有许多缺点:
1、人工操作,操作及重复的步骤太多,不可避免容易出错。
2、速度慢,效率低。只能保证30-40%的孔有细胞生长。对于高通量筛选来说,不能满足要求。
3、不能保证单克隆,需要亚克隆3-4次,所以,人工和耗时都较多。
4、有限稀释在ELISA检测前,并不知道哪一个克隆满足抗原特异性的要求。所以,需要对所有克隆,都要zui少做一次ELISA鉴定。
除了有限稀释方法,现在相对先进的细胞分选技术也得到普遍应用。一般就是细胞分选仪或者流失细胞技术对杂交瘤细胞进行筛选。其原理是先将细胞分散开,没有细胞结团。通过在细胞表面或细胞内标记荧光信号。当单个细胞在压力作用下单个通过玻璃毛细管的时候,仪器可以自动检测单个细胞的荧光信号强度。荧光信号强度反应这个细胞的相应抗体表达水平。zui后,将高荧光信号强度的细胞收集,再通过有限稀释得到高水平表达的单克隆;或者也可以使用单细胞收集器收集高水平表达的单个杂交瘤细胞。