鸡脑脊髓炎病毒抗体（AEV Ab）试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的：

本鸡脑脊髓炎病毒抗体（AEV Ab）试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中脑脊髓炎病毒抗体（AEV Ab）表达。

实验原理

本鸡脑脊髓炎病毒抗体（AEV Ab）试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡脑脊髓炎病毒抗体（AEV Ab）表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中脑脊髓炎病毒抗体（AEV Ab）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF相比较，从而判定标本中鸡脑脊髓炎病毒抗体（AEV Ab）的存在与否。

试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶

2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶

3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶

4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份

5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张

6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．鸡脑脊髓炎病毒抗体（AEV Ab）不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：鸡脑脊髓炎病毒抗体（AEV Ab）操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品OD 值< 临界值（CUT OFF）者为脑脊髓炎病毒抗体（AEV Ab）阴性

阳性判定：样品OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为脑脊髓炎病毒抗体（AEV Ab）阳性

注意事项

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．鸡脑脊髓炎病毒抗体（AEV Ab）试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M 的硫酸，使用时必须注意安全。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 个月