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抗体有效期以及怎么储存抗体

时间:2012-07-17      阅读:15293

抗体由于性质和所使用的储存条件不同,其存储的“保质期”可能从几周到几年不等。每个抗体存储的*条件是*的,然而我们还是可能总结抗体存储的一些建议和一般准则。抗体的储存时间取决于抗体固有的性质和储存条件。抗体(尤其是酶)必须存放在适当的温度和pH值范围,为了维持蛋白质的活性,以及防止其聚集,经常保存在一定浓度的甘油,蔗糖,或类似的物质里面。表1 总结了抗体储存的一般准则以及其他的注意事项。

  水, 4C 25-50%的甘油或乙二醇,-20C 冻结在-20 - 80C或在液氮 冻干
典型的保质期 1个月 1年内 多年 多年
抗体浓度 1-5 mg/ml 1-5 mg/ml 1-5 mg/ml 1-5 mg/ml
稀释载体蛋白 BSA BSA BSA 没有
消毒或抗菌的要求 没有 没有
抗氧化剂 2-ME, DTT 2-ME, DTT 没有 没有
荧光共轭 避光保存 避光保存 避光保存 避光保存
pH值 7.2-7.6 7.2-7.6    
金属螯合剂 EDTA EDTA    
 
表1. 抗体贮存条件
储存条件
实验室设备
冰箱

不要用没有霜冻的冰箱储存需要零度以下保存的抗体。一般的家用冰箱是没有霜冻的,而且它们可以通过反复的自动解冻来防止霜冻的形成。

储存容器

带有标记的抗体应该储存在黑色瓶子里或者用锡箔纸盖住瓶子。

温度

一般来说,抗体存放在≤4℃的清洁,灭菌的玻璃或塑料管。贮存在室温下通常会由于微生物的生长导致抗体退化和/或失活。抗体储存液放在4℃环境中1天或者几周内其活性不会受到明显影响。另外,抗体中可以加入终浓度为50%的甘油或乙二醇储存于-20℃。通常我们为了避免反复冻融,可以分装抗体。我还可以加入抗微生物药物(如*或硫柳汞)以避免微生物的生长。

抗冻剂:甘油和乙二醇

冰晶的形成能够破坏蛋白质的结构,因此导致抗体失效。甘油或乙二醇等防冻剂可以防止水分子之间氢键的形成,加入到溶液中可以降低其的凝点。所以,溶液的凝点取决于抗冻剂的组成和浓度。具体的见表2。

  10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
甘油 -2 -5 -10 -16 -22 -34 -38 -19 -2 17
乙二醇 -4 -7 -15 -23 -34 -48 -51 -45 -29 -12
 
表2. 甘油和乙二醇在水中不同浓度(百分比%)的凝固点(摄氏度)

Note: 乙二醇是有毒性的,使用的时候一定要注意安全。

当储存温度低于抗体溶液真实的凝点的时候,抗体溶液就会凝固。但是,这个时候并不会形成冰晶,而是发生了玻璃化作用,其可以保持抗体结果完整性。

为了增加抗体的稳定性,可以向抗体中加入终浓度为50%的甘油或乙二醇储存于-20℃。通常为了避免反复冻融,可以分装抗体。

因为普通甘油中含有微生物污染,所以使用无菌的甘油显得尤为重要。

灭菌和杀菌剂

抗体制剂应通过使用0.45微米的过滤器过滤和消毒的,并且其必须进行无菌处理,以防止微生物污染。

抗微生物药物,如终浓度为0.02-0.05%(W/V)的*(NaN3)或终浓度为0.01%(W/V)的硫柳汞可以抑制微生物的生长。

*对于大多数细胞和组织是有毒的。*溶液中抗体不应该被直接用在活细胞中,或在体内的研究。此外,*的干扰与大多数共轭反应。*可以通过凝胶过滤或透析清除。

蛋白酶抑制剂

蛋白酶抑制剂可以防止蛋白质水解。由于腹水和血清制试中都含有蛋白酶,所以储存这类抗体和制剂的时候加入蛋白酶抑制剂尤为重要。。冷藏和/或加入蛋白酶抑制剂可用于防止这种降解。

抗体浓度

抗体浓度过低(<1毫克/毫升)更容易发生抗体的失活以及增加物理吸附造成的损失。因此,我们都要尽量的保持抗体(例如,1-5毫克/毫升)在储存期间的浓度。通常的做法是添加“载体”蛋白质,如纯化牛血清白蛋白(BSA)以防止这种降解和损失。

多克隆抗体

多克隆抗体在血清中于-20℃保存十年其活性损失不大。然而,一旦抗体被纯化后,储存在50%的甘油中于-20℃保存,即使没有冻融,其活性的损失也可以观察到,尽管其进程仍然非常缓慢。即使没有甘油,只要你*冻融,抗体也可以存储在-20℃几年甚至几十年。另一个重要的事情是,该抗体浓度应高于1毫克/毫升,因为稀的抗体容易失去活性而且容易造成物理吸附导致的损失。

单克隆抗体

单克隆抗体可以保存在50%的甘油存放于-20℃。也可以将其保存在饱和硫酸铵于4℃或-20℃保存。多年未见有失活、细菌滋生以及氧化。而冻干法(冷冻干燥,干燥或从冰冻状态)为一些冰冻以后不稳定抗体提供了一种替代的保存方法。在大多数情况下,冻干的抗体是存放在-20℃。虽然冷冻干燥有许多优点,它需要昂贵的设备和劳动力。

带标记的抗体

带标记的抗体一般储存在黑色容器中或者用锡箔纸盖住。

酶标记抗体

碱性磷酸酶和其他酶结合物对于冷冻特别敏感,一般应在4C短期存储。

标记抗体长期保存是在终浓度为50%的甘油或乙二醇中于-20C保存。虽然某些酶结合物可在无保护剂的情况下于-20C储存,但必须分装,以防止反复冻融。

荧光标记抗体

荧光遇光容易分解,荧光标记的试剂(不只是抗体)必须避光保存,其应该存放在4C、避免让其凝固。

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