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面议操作步骤:
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3.42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟
4.每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
5.根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
产品名称:Mach1-T1 感受态细胞100ul*100
包装:100ul*100
分类:克隆感受态细胞
保存条件:4℃保存,一年有效。
细胞种类:
冻存
对培养的细胞进行冻存的方法是将细胞置于含有(DMSO)等冷冻保护剂的*培养基中于液氮中储存。冷冻保护剂可降低培养基的冰点,并可减缓冷却速度吗,大大降低冰晶形成的危险 (冰晶可损伤细胞,导致细胞死亡)。
注:DMSO 可促进有机分子进入组织。操作含DMSO的试剂时,应采用与此类物质安全危害相适应的设备和操作规范,并应按照当地法规处置此类试剂。
细胞冻存指导原则
冻存细胞系以备将来之用时,必须遵守以下原则。与其他细胞培养操作一样,我们建议您严格遵守您所用细胞系附带的操作说明,以便获得结果。
1)在高细胞浓度情况下进行培养细胞的冻存,并且细胞传代次数尽可能少。确保冻存前活细胞百分比至少为90%。请注意冻存条件取决于所用细胞系。
2)细胞应缓慢冷冻,可使用可控制降温速度的低温冰箱或者低温冷冻容器使温度每分钟大约降低1°C。
3)必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂
4)将冷冻的细胞于 -70°C 以下温度储存;温度高于 -50°C 时,冷冻的细胞将开始变质。
5)必须使用无菌冻存管储存冷冻的细胞。装有冷冻细胞的冻存管可浸于液氮或者在液氮上方的气相空间内保存
6)必须穿戴个人防护设备。
7)所有与细胞接触的溶液和设备均应为无菌状态。必须采用正确的无菌技术,并且在层流通风橱内进行。
升麻Cimicifuga foetida Norkhellol 4-羟基-7-(羟基甲基)-5H-并[3,2-G][1]本并-5-酮 4439-68-3 C12H8O5 ≥97%
梓醇Cctclpol412-4-920mg
三尖杉Cephalotaxus founei Taiwanhomoflavone B none 509077-91-2 C32H24O10 本丙安酯(100145
检查舒林酸100335-200001常温,避光50mg
非洛地平相关物质A标准品96382-71-7 15mg
培哚普利相关物质E标准品 ea
紫茉莉Mirabilis jalapa none 135626-13-0 C16H10O6 ≥95% 言酸轻吗非同 (受控(Y0000446
螺螨酯标准品 录嘧磺隆标准品 录灭杀危标准品
Nifedipine 硝本地平标准品21829-25-4 125mg
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷 7084-24-4 HPLC≥98%;5mg 订购|咨询
莱菔子 Semen Raphani 1g
3-轻化去轻松苓醋3-xy7nogenationtoxy7nogenSongLingacid5mg
Eichlerianic acid EICHLERIANIC ACID 56421-13-7
酸枣仁皂甙A酸枣仁皂苷A55466-04-1Jujuboside A
;L- 20mg 订购|咨询
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注意事项:
1. 感受态细胞好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。