磷酸化转录调节因子C/EBPε抗体

商品详情：

英文名；phospho-CEBPE (Thr74)

别    名；CEBPE (phospho T74); p-CEBPE (phospho T74); C/EBP epsilon; CCAAT/enhancer binding protein (C/EBP) epsilon; CCAAT/enhancer binding protein epsilon; CCAAT/enhancer-binding protein epsilon; CEBPE; CEBPE_HUMAN; CRP 1; CRP1.

研究领域；细胞生物  免疫学  信号转导  表观遗传学

抗体来源；Rabbit

克隆类型；Polyclonal

交叉反应；(predicted: Human, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep, )

产品应用；ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 （石蜡切片需做抗原修复）

not yet tested in other applications.

optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

理论分子量；31kDa

细胞定位；细胞核

性    状；Liquid

浓    度；1mg/ml

免 疫 原；KLH conjugated synthesised phosphopeptide derived from human CEBPE around the phosphorylation site of Thr74.: PG(p-T)P

亚    型；IgG

纯化方法；affinity purified by Protein A

保存条件；Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项：

抗体FC验证实验的详细步骤如下：

一、细胞表面染色操作

1、细胞计数：收集培养细胞于15mL离心管，500g离心4分钟后，去上清。

2、制备单细胞悬液：用0.5%BSA/PBS重悬细胞，离心后再次去上清，调整浓度为1x106个细胞/mL，分到96孔板中，每孔100μl。

3、可选：阻断Fc受体（孵育10-20分钟）。

4、一抗孵育：每孔加入100μl稀释的一抗，2-8℃反应30分钟。

5、洗涤：离心去上清后，用0.5%BSA/PBS重悬，重复洗涤两次。

二抗孵育（非荧光抗体）：加入荧光二抗，避光孵育30分钟。

再次洗涤，重复步骤。

重悬细胞：用0.5%BSA/PBS保存，上机分析。

二、细胞胞内染色流程

1、细胞计数与制备同上。

2、固定：加入细胞固定剂，20分钟后洗涤。

3、细胞通透：通透后洗涤。

4、可选：阻断Fc受体。

抗体纯化的方法及步骤：

抗体是一类免疫蛋白，可识别并结合特定抗原，在生物研究以及临床应用中，纯化得到高质量的抗体十分重要。

一、凝胶过滤层析法

凝胶过滤层析法的原理是基于抗体分子的不同大小，利用不同孔径的凝胶过滤介质将目标分子（抗体）与较大分子（如蛋白质等杂质）分离开来。

具体操作步骤如下：

1. 将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的凝胶柱中。

2. 使用缓冲液进行洗脱，较大分子无法通过凝胶柱而流出。

3. 目标抗体分子大小适中，可通过凝胶柱并被保留下来。

4. 最后使用洗脱缓冲液将目标抗体从凝胶柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。

二、亲和层析法

亲和层析法的原理是利用抗体分子与抗原之间的特异性结合来实现目标抗体的纯化。

具体操作步骤如下：

1. 将含有目标抗体的混合物加入到预先包含特异性结合配体(如蛋白A、蛋白G等)的亲和层析柱中。

2. 目标抗体与配体之间发生特异性结合。

3. 使用洗脱缓冲液将非特异结合的组分洗脱掉。

4. 最后使用洗脱缓冲液将目标抗体从亲和层析柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。

三、离子交换层析法

离子交换层析法的原理是利用目标抗体分子与离子交换柱中固定的离子之间的相互作用来实现纯化。

具体操作步骤如下：
1. 将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的离子交换柱中。

2. 使用缓冲液进行洗脱，使与固定离子相同电荷的分子无法通过离子交换柱而流出。

3. 目标抗体由于表面电荷不同，能够通过离子交换柱被保留下来。

4. 最后使用洗脱缓冲液改变pH或盐浓度等条件，将目标抗体从离子交换柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。

四、逆向相色谱法

逆向相色谱法的原理是利用目标抗体分子与逆向相色谱柱中固定的疏水基团之间的相互作用来实现纯化。

具体操作步骤如下：

1. 将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的逆向相色谱柱中。

2. 使用缓冲液进行洗脱，使疏水性较低的分子无法通过逆向相色谱柱而流出。

3. 目标抗体由于表面疏水性不同，能够通过逆向相色谱柱被保留下来。

4. 最后使用洗脱缓冲液改变溶剂极性等条件，将目标抗体从逆向相色谱柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。

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