抗体分子标记技术：

（一）原理

当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所**的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。

（二）准备

1.试剂

经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5；无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5）；胺T反应终止缓冲液；

2.仪器

凝胶过滤柱；￥-记数器；玻璃纤维滤。

（三）操作要点

1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行；

2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年；

4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；

5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；

6.碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。

EHD4蛋白抗体

商品属性：

别    名；EH domain containing 4; EH domain containing protein 4; EH domain-containing protein 4; EH domaincontaining protein 4; EH-domain containing 4; EHdomain containing 4; EHdomain containing4; Hepatocellular carcinoma associated protein 10/11; hepatocellular carcinoma-associated protein 10/11; hepatocellular carcinoma-associated protein HCA11; HGNC:3245; EHD4_HUMAN; Ortholog of rat pincher; PAST homolog 4; PAST4.

商品详情：

研究领域；心血管  细胞生物  信号转导

抗体来源；Rabbit

克隆类型；Polyclonal

交叉反应；(predicted: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Horse, Sheep, )

产品应用；ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 （石蜡切片需做抗原修复）

not yet tested in other applications.

optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

理论分子量；61kDa

细胞定位；细胞浆 细胞膜

性    状；Liquid

浓    度；1mg/ml

免 疫 原；KLH conjugated synthetic peptide derived from human EHD4: 441-541/541

亚    型；IgG

纯化方法；affinity purified by Protein A

缓 冲 液；0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件；Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项；This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

实验原理 :

（1）特异性结合抗原：抗体本身不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞，通常需要补体或吞噬细胞等共同发挥效应以清除病原微生物或导致病理损伤。然而，抗体可通过与病毒或毒素的特异性结合，直接发挥中和病毒的作用。

（2）活补体：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补体，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体。

（3）结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，参与免疫应答。

（4）可通过胎盘及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通过胎盘进入胎儿血流中，使胎儿形成自然被动

免疫。免疫球蛋白A（IgA）可通过消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。

（5）具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。

（6）抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同：不耐热，60～70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质，均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白，再经透析法将其纯化。

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